Her-2 en el carcinoma mamario

El gen c-erb B-2 (HER-2/neu) es un oncogen inicialmente identificado por transfección de células NIH3T3 con DNA de neuroblastomas y glioblastomas de rata inducidos por tratamiento perinatal con etilnitrosourea; de ahí su denominación neu.

 

El análisis de clones de cDNA del oncogén neu demostró que éste codifica una proteína transmembranal muy semejante a la proteína codificada por el oncogen v-erb-B, del virus de la eritroblastosis aviar y responsable del desarrollo de eritroleucemias y sarcomas en pollos, que, de hecho, es una forma truncada del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR).

 

Por su homología con v-erb-B, el neu fue denominado c-erb B-2 o HER-2 (Human EGFR-2).

 

El gen HER-2 codifica una proteína transmembrana. Su parte extracelular es un receptor que interacciona con un factor de crecimiento todavía no identificado. Su zona intracelular tiene actividad tirosin-quinasa. La estimulación del receptor activa la region tirosin-quinasa que fosforila a una serie de proteínas citoplasmáticas transmitiendo la señal estimuladora al interior de la célula.

 

Para que se produzca la activación de la región tirosin-quinasa es necesario que la proteína se dimerice; es decir se formen dímeros entre dos proteínas adyacentes.

El gen HER-2 forma parte de una familia de genes que codifican receptores con actividad tirosin-quinasa. Esta familia incluye los genes HER-1 (que es el EGFR), HER-3 y HER-4.

 

A diferencia de HER-2, los factores de crecimiento que se unen a las porciones extracelulares de las proteínas codificadas por HER-1, HER-3 y HER-4 son bien conocidos. De forma similar a HER-2, las proteínas de todos estos miembros de la familia forman dímeros al interaccionar con sus factores de crecimiento. Se ha visto que HER-1, HER-3 y HER-4 pueden formar homodímeros (es decir dímeros de dos proteínas iguales; HER1-HER-1 o HER-3-HER-3) o bien heterodímeros (HER1-HER-3). Se ha visto que HER-2 puede formar parte de estos heterodímeros; y se ha dicho que tal vez HER-2 no tenga un factor de crecimiento propio, y que su participación en la estimulación de la proliferación celular pasa por formar heterodímeros. Se ha visto que la capacidad estimulante de los homodímeros es menor que la de los heterodímeros.

 

HER-2 es un oncogen que, en la especie humana, se suele activar por amplificación génica. Los tumores con activación de HER-2 tienen más de dos copias del gen. Este exceso de copias se traduce en un incremento en los niveles de la proteína codificada por HER-2, una mayor probabilidad de heterodímeros, y una mayor actividad de estimulación celular.

Significado biológico de la activación de HER-2

Existen muchas evidencias in vitro que apoyan la hipótesis de que la activación de HER-2 confiere una mayor agresividad biológica a las células del cáncer de mama.

Aunque la frecuencia de activación de HER-2 varia de serie a serie, se acepta que HER-2 está activado en un 20-30% de los cánceres de mama. Se han publicado muchas series distintas discutiendo la influencia real de este fenómeno molecular, así como su utilidad práctica como factor pronóstico en el manejo de las pacientes con cáncer de mama. La gran variabilidad de los resultados de estos estudios radica en diferencias metodológicas así como en la selección de las pacientes. Sin embargo, una gran mayoría de estudios apoya la idea que la activación de HER-2 se asocia a un pronóstico peor en las pacientes con cánceres de mama con metástasis ganglionares. Sin embargo, existe una controversia en relación al significado pronóstico de esta alteración en las pacientes con ganglios negativos. En los últimos años se ha postulado que la activación de HER-2 podría ser de gran utilidad en la valoración de sensibilidad de los tumores a la administración de adriamicina, resistencia a tamoxifén, o indicación de tratamiento con Trastuzumab (HerceptinR).

Métodos de estudio de la activación de HER-2

Existen varios métodos para valorar la activación de HER-2.

Como se ha dicho previamente, HER-2 se activa por amplificación génica. Esto quiere decir que las células tumorales tienen un número mayor de copias del gen en relación a las células normales. En las células, el exceso de copias del gen se corresponde con un aumento en los niveles de RNA mensajero de HER-2 y se traduce en un aumento en los niveles de la proteína codificada por HER-2. Esto quiere decir que podemos utilizar distintos métodos para valorar un mismo fenómeno: métodos de estudio de DNA, de RNA mensajero o de proteínas.

Métodos de estudio de DNA: Son el Southern blot,

la Hibridación cromosómica con sondas fuoresceinadas (FISH),

  la PCR diferencial


Esquema de la técnica de PCR diferencial para análisis de amplificación de HER-2. Consiste en coamplificar dos genes; uno de ellos (IFN) no está amplificado, el otro (NEU) es el que se quiere analizar. La comparación de intensidad de bandas en los geles tras análisis electroforético permite obtener el resultado.


Ejemplo de PCR diferencial para análisis de amplificación de HER-2. Nótese que el cociente de intensidad de bandas en el carril C es parecido al del control positivo (PC), que corresponde a una línea celular de cáncer de mama con 8 copias de HER-2.

Métodos de estudio de RNA: Son el Northern blot,

Esquema de la técnica de Northern Blot.

la hibridación in situ de RNA, la PCR-Transcriptasa inversa.

Esquema de la técnica de hibridación in situ.

 

 

Métodos de estudio de Proteínas: Western blot o inmunohistoquímica.

Principios de la técnica de Avidina-Biotina-Peroxidasa.

 

 

Todas estas técnicas tienen ventajas e inconvenientes. Las más fiables son aquellas en las que la determinación de la activación de HER-2 se efectua en su contexto morfológico, porque es imprescindible que la valoración se efectúe exclusivamente en el componente infiltrante. Aunque patogenéticamente sea difícil de entender para un gen implicado en la proliferación celular, con cierta frecuencia se observan carcinomas ductales infiltrantes HER-2 negativos que coexisten con un carcinoma intraductal (presumiblemente preexistente) que es HER-2 positivo; y en estos casos el tumor debe ser interpretado como HER-2 negativo.

 

Todo esto limita la elección al FISH y la inmunohistoquímica.

La FDA americana ha aprobado tres métodos para valoración de activación de HER-2.

 

Dos de ellos (Inform/Ventana; Pathvysion/Vysis) utilizan FISH y han sido aprobados para valoración de HER-2 como factor pronóstico e indicativo de tratamiento con adriamicina. Un tercer método (Herceptest/DAKO) ha sido aprovado para valoración de tratamiento con Trastuzumab (HerceptinR). Desde entonces varios artículos han comparado ambas técnicas con resultados e interpretaciones distintas.

Recientemente varios grupos ha comparado la activación de HER-2 medida mediante Herceptest y los resultados de FISH.

 

La correlación es buena para los casos negativos (Herceptest 0 o 1+) y para los casos claramente positivos (Herceptest 3+). Sin embargo, existen discrepancias en el grupo intermedio (Herceptest 2+), en las que las técnicas de FISH sólo detectan amplificación en un 10% de los casos. Estas discrepancias pueden ser debidas a problemas de sensibilidad del Herceptest (que detecte expresión no atribuible a amplificación), del FISH (que sea poco sensible en la detección de amplificaciones de bajo nivel), a ambas, o que simplemente refleje el hecho que ambas técnicas estudian el mismo fenómeno desde perspectivas distintas (DNA y proteinas).

 

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